Бактериофаги вызывающие хронические и лизогенные инфекции

Бактериофаги, вызывающие хронические и лизогенные инфекции, не образуют характерных бляшек, хотя на плотных средах появляются зоны угнетенного роста, которые можно рассматривать как количественный эквивалент бляшек. Прямой визуальный подсчет бактериофагов производится с помощью электронного микроскопа. При подготовке препарата используется методика негативного или позитивного контрастирования; для получения достоверных результатов необходимо стандартизировать процедуру подготовки материала и просматривать участки равной площади. Данный метод трудоемок и отнимает много времени, однако вполне оправдывает себя, поскольку позволяет получать данные о количестве вирусных частиц, оценивать их качественный состав и по внешнему виду вирионов идентифицировать объект до семейства. Попутно можно определить размер вириона, используя в качестве калибратора латексные шарики стандартного диаметра.

Сравнение результатов (количества PFU и числа вирионов, подсчитанных под электронным микроскопом) позволяет оценить эффективность высева бактериофага; этот показатель колеблется и обычно не превышает 50%, что зависит не только от стабильности вирионов, но и от физиологического статуса хозяина. Препаративное получение бактериофагов. Суспензию вирусных частиц, смытую с поверхности плотной среды, или фаголизат суспензионной культуры освобождают от фрагментов разрушенных клеток фильтрованием через мембранный фильтр диаметром пор <0,2 мкм. Суспензию бактериофага обычно концентрируют скоростным центрифугированием (~60 тыс. g). Для получения очищенного препарата используется равновесное центрифугирование в градиенте плотности сахарозы или хлорида цезия. Большинство бактериофагов хранят при 4°С в суспензии или в виде лиофильно высушенного препарата. Для типовых штаммов рекомендуется криохранение при -70°С на среде с 50%-ным глицерином в качестве антифриза.