Механическое инфицирование растения

Механическое инфицирование растения осуществляют, втирая суспензию вирусных частиц или сока инфицированного растения тампоном, шпателем или щеткой. Для заражения большого числа особей или высокорослых растений с жесткими листьями обычно применяется пульверизатор, распыляющий смесь вирусной суспензии с зернами абразива. Целое растение является сложной моделью, на которой трудно проследить этапы онтогенеза вируса. Поэтому механизмы репликации фитовирусов часто изучают на протопластах. В данном случае состав и объем инокулята, условия инфекции и последующую обработку материала легко контролировать. Для получения протопластов используют молодые листья и стандартные наборы («коктейли») гидролитических ферментов. Недостатком такой модели служит кратковременность ее существования (как правило, несколько суток), после чего протопласты либо разрушаются, либо регенерируют клеточную стенку. Фитопатологические исследования проводят на клеточных культурах, которые можно получить практически из любого растения. Для этого фрагмент растительной ткани помещается в стерильных условиях на питательную среду, содержащую минеральные соли, сахара, витамины и регуляторы роста (прежде всего, ауксины и цитокинины), а также агар в качестве уплотнителя. Через некоторое время клетки дедифференцируются и приступают к делению, в результате чего образуется бугорчатая масса, или каллус (англ, callus cell culture; от лат. callus — наплыв), который периодически пересевают на свежую питательную среду. Каллус инфицируют вирусом, разбрызгивая суспензию вирионов по его поверхности. Недостаток данной модели заключается в более низкой, чем при инфицировании целого растения, частоте заражения; например, вирус табачной мозаики (Tobacco mosaic virus, TMV) обнаруживается лишь в 40% клеток. В некоторых случаях каллус удается мацерировать, и затем выращивать в погруженной клеточной культуре; при этом частота заражения может существенно увеличиться.