Главный метод культивирования и количественного учета бактериофагов

Главный метод культивирования и количественного учета бактериофагов, использующий способность образовывать негативные колонии на «газоне» чувствительных бактерий, был предложен в начале XX в. Феликсом д’Эррелем. Он до сих пор применяется в рутинной работе с этими вирусами.

Культивирование бактериофагов. Поскольку бактериофаги размножаются в клетках специфического хозяина, ему необходимо обеспечить оптимальные условия роста и инфицировать его в период активного развития культуры, обычно в логарифмической фазе. Бактериофагов можно культивировать: частиц вирусов и клеток хозяина в питательной среде с полужидким агаром (0,3-0,9%); смысл этой процедуры состоит в иммобилизации будущих зон лизиса. Количественный учет бактериофагов. Через определенное время после заражения (~3 ч для жидкой культуры и ~20 ч для культуры на агаризованной среде) вирусная инфекция проявляется визуально: в первом случае культура становится прозрачной, во втором случае на поверхности агара образуются бляшки.

Лизогенные бактериофаги обнаруживают себя при спонтанном переходе к литическому циклу, а также при индукции под воздействием УФ-облучения (~1 мин) или ингибитора синтеза ДНК (митомицина С; ~1 мкг/мл).

Самый распространенный способ количественного учета бактериофагов — это титрование, основанное на подсчете числа бляшек, которые образуются в «двухслойной» культуре. Для достоверного подсчета перед высевом готовят серийные 10-кратные разведения вирусной суспензии или фаголизата. Принято считать, что отдельная бляшка соответствует инфекционной частице, или бляшкообразующей единице (англ, plaque forming unit, PFU). Число PFU на определенный объем (обычно 1 мл) исходной суспензии указывает титр фага; он выражается произведением цифры первого разряда на степень десяти, например 3106, или округленным десятичным логарифмом этой величины (в данном случае 6).