Интеграза Int

Интеграцию осуществляет продукт фагового гена — интеграза Int, которая действует совместно с бактериальным ДНК-связывающим белком IHF. Для эксцизии помимо них требуется другой продукт фагового гена — эксцизионаза Xis (сокр. от англ, excision). Сайт AttP содержит семь субсайтов для связывания интегразы Int, три субсайта для связывания ДНК-изгибающего белка IHF (HI, Н2 и Н’) и субсайт для связывания белка Xis. Сайт AttB содержит два субсайта для связывания интегразы Int. При интеграции и эксцизии интеграза Int выступает в качестве сайтспецифичной топоизомеразы I. Она наносит однонитевые разрезы в кор-последовательностях обоих рекомбинационных сайтов и одновременно с этим устраняет их суперспира — лизацию, что позволяет образовать перекрестные фосфодиэфирные связи. Предполагается, что в результате миграции перекреста образуется хиазма Холлидея с гетеро — дуплексным участком, который укладывается в границы сайта POP Интеграза Int (40 кДа) принадлежит к суперсемейству «тирозинных» рекомби — наз, которые участвуют в разнообразных перестройках ДНК у прокариотов — репликации, декатенации сцепленных репликонов, сегрегации сестринских репликонов и т. д. Все эти ферменты, действуя в тетрамерной форме, катализируют обмен нитями ДНК путем образования и демонтажа крестообразных структур, или хиазм Холлидея (для этого требуется последовательно нанести две пары ss-разрезов, а затем произвести лигирование). Такие реакции не требуют затраты энергии и происходят посредством образования ковалентно связанных З’-фосфотирозинных ДНК-белковых интермедиатов. Интеграза Int содержит большой С-концевой домен, который присоединяется к обеим кор-последовательностям и катализирует ферментативные стадии рекомбинации. В свою очередь, небольшой N-концевой домен интегразы связывается за пределами участка обмена нитями.