Лазерная конфокальная микроскопия

Лазерная конфокальная микроскопия позволяет добиться лучшего разрешения, однако на практике приходится искать компромисс между качеством изображения и разрушением препарата под воздействием лазерного пучка. С помощью данного метода, получившего широкое применение в вирусологии, можно определить локализацию синтеза вирусных белков, проследить транспорт вирионов в клетках и органах хозяина и т. п. В настоящее время основным методом визуального наблюдения вирусных частиц и изучения их строения служит Просвечивающая электронная микроскопия (англ, transmissive electron microscopy, ТЕМ), используемая в разных модификациях. Напомним, что первые изображения относительно крупных вирусов были получены в конце 1930-х годов (см. рис. 2). Однако тогда еще не удавалось обнаружить детали строения вирионов, что объяснялось не столько несовершенством приборов, сколько использованием грубых методов при подготовке препаратов. В начальный период развития электронной микроскопии вирусы делали видимыми путем вакуумного напыления атомов металла, что приводило к сглаживанию деталей поверхности вириона. В конце 1940-х годов разрешение электронного микроскопа достигло 3-4 А, однако при исследовании биологических объектов такой субмолекулярный уровень уже не нужен. В просвечивающем электронном микроскопе контраст изображения создается за счет упругого рассеивания электронов на ядрах вещества, из которого состоит образец. Чем выше атомный номер элемента, тем сильнее рассеиваются электроны. На визуальном уровне этот эффект проявляется в том, что участки препарата с высоким содержанием тяжелых элементов выглядят темными (электроноплотными). Поскольку вирусные частицы в основном состоят из легких элементов, на фоне углеродной или полимерной подложки их изображение получается слабоконтрастным. Поэтому для визуализации частиц их необходимо оттенять веществом, содержащим атомы тяжелых элементов, например вольфрама, золота, свинца или урана; такой прием называется контрастированием.