Галерея
10226 10775 10933 11397 11485 11822 12520 12693
Интересные записи
Топовое
Случайное

Метод негативного контрастирования

Метод негативного контрастированияМетод Негативного контрастирования (англ, negative staining) применяют для изучения формы вирусных частиц. С этой целью их осаждают на полимерной подложке (ее наносят на поддерживающую металлическую сеточку), а затем обрабатывают раствором вещества-контрастера, обволакивающего частицы и проникающего в неровности их поверхности. Излишек контрастера удаляется фильтровальной бумагой; препарат высушивают на воздухе и помещают в держатель электронного микроскопа. В качестве контрастирующих соединений обычно применяют 1-2%-ный раствор ацетата уранила или калиевой соли фосфорно-вольфрамовой кислоты. Атомы тяжелого элемента создают темный фон вокруг светлых вирусных частиц (отсюда происходит термин «негативное контрастирование»). Пространственное разрешение получаемых таким образом изображений составляет ~1 нм, что позволяет выявить даже отдельные капсомеры. Основными лимитирующими факторами в данном случае выступают толщина подложки и размер зерна контрастирующего вещества. Если оно проникает через поры (супер)капсида, удается выявить внутреннее строение ви — риона. Метод негативного контрастирования относительно прост и не занимает много времени; поэтому его широко применяют в вирусологической диагностике. Анализируемым материалом могут быть биологические жидкости, в том числе слюна, сыворотка крови, водный экстракт фекалий и т. п. Для постановки диагноза часто достаточно идентифицировать инфекционного агента до семейства, как правило, по морфологическим признакам вириона. В зависимости от сложности обработки клинического материала такое исследование (с учетом времени на приготовление препарата) занимает от 15 мин до 3 ч. В последнее время возможности метода негативного контрастирования расширились благодаря применению компьютерной обработки полученных изображений. Если изучаются одинаковые частицы, разрешение можно улучшить при помощи суммирования изображений. При этом повышается соотношение сигнал/шум и нивелируются неровности подложки. Фотографируя частицы под разными углами наклона препарата, можно получить их объемное изображение. Таким способом недавно получены ЗО-изображения репликативных комплексов вируса гриппа, рибонуклеопро — теина вируса кори и т. п.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *