Транскрипция поздних генов

Транскрипция поздних генов провоцирует новый этап репликации — по механизму «катящееся кольцо», в результате чего образуется ds-конкатемер, причем вытесняться может любая из нитей. Упаковка геномной ДНК осуществляется с помощью сайтспецифичного механизма. Вирусная терминаза распознает cos-сайт и наносит в этой области надрезы, отстоящие на плюснити и минус-нити на расстояние 12 н. друг от друга, благодаря чему образуются липкие концы. После упаковки ДНК к головке присоединяются отдельно собранные хвостовые отростки. В результате лизиса клетки с помощью системы эндолизин/холин в окружающую среду выходит -300 частиц. Фаг лямбда и генетические конструкции на его основе широко применяются в лабораторной практике. На левом плече геномной ДНК находится участок длиной около 15 тыс. п. н., который содержит гены, участвующие в лизогенном цикле. Для развития по литическому пути (когда на поверхности агаризованной среды образуются характерные бляшки) такие гены не нужны, и поэтому данный участок можно безболезненно удалить, заменив его чужеродной ДНК. Сайтспецифичная упаковка гибридной конструкции производится in vitro. Для клонирования «интересующих» последовательностей ДНК используется Космида (англ, cosmid; сокр. от англ, cohesive site и plasmid). Она представляет собой кольцевую молекулу, содержащую вирусные сайты Ori и Cos, сайт распознавания эндонуклеазой, а также репортерный ген, например ген устойчивости к ампициллину (рис. 43). После разрезания кольца эндонуклеазой к липким концам линейного продукта можно присоединить «интересующую» последовательность (размером до 40 тыс. п. н.). Полученная генетическая конструкция упаковывается в капсид, и вирусными частицами инфицируется индикаторный штамм Е. coli К12. У представителей данного семейства сферический вирион имеет икосаэдриче — скую симметрию, его диаметр составляет 63 нм. Внешний белковый капсид (очень похожий на капсид аденовирусов) имеет толщину 3 нм; на вершинах икосаэдра расположены пепломеры длиной 20 нм, обеспечивающие адсорбцию на клеточных рецепторах. Одна из вершин икосаэдра отличается от остальных по морфологии и составу; в этом месте формируется портал для упаковки ДНК.