Хозяева подовирусов
Хозяева подовирусов разнообразны — среди них встречаются грамотрицатель — ные и грамположительные бактерии, а также микоплазмы; они принадлежат к филам ВХ Cyanobacteria, BXII Proteobacteria, ВХШ Firmicutes и BXIV Actinobacteria. В это большое семейство входят бактериофаги, которые вызывают преимущественно литическую инфекцию и образуют сложно устроенные вирионы. Размер генома подовирусов составляет 19-44 тыс. п. н. К икосаэдрической головке, диаметр которой 40-60 нм (высота несколько больше ширины), через переходник (англ, connector) присоединяется короткий несократимый хвостовой отросток (<10 нм). С этим морфологическим признаком связано название данного семейства (греч. podos — нога). В области коннектора, а также на вершинах капсида иногда находятся дополнительные придатки (рис. 37).
Цикл развития вирулентного фага Т7 подробно изучен. При инфицировании типовых штаммов Е. coli в стандартных условиях лизис культуры начинается через 12- 15 мин (при 37°С) или через 20-25 мин (при 30°С). Из одной клетки выходит в среднем 200 частиц. Геном фага Т7 (39937 п. н.) содержит 56 генов, в том числе гены субъединиц полимеразы. На кодирующие последовательности приходится 92% емкости генома; остальное — это прямые концевые повторы (160 п. н.), оп-сайты, промоторы и сайты процессинга РНКазы; часть ORF взаимно перекрывается. Отличительной особенностью фага Т7 служит медленный процесс проникновения, занимающий до 10 мин и сопряженный с действием вирусной РНК-полимеразы, которая устойчива к рифампицину и высокоспецифична по отношению к промоторам. Сначала в клетку поступает участок ДНК размером 850 п. н. с тремя самыми ранними генами (ген ингибитора хозяйских рестриктаз, ген РНК-полимеразы и ген протеинкиназы) (рис. 38). Транскрипция осуществляется с помощью бактериальной РНК-полимеразы, распознающей промотор самых ранних генов, который успешно конкурирует с сильными промоторами клетки-хозяина. Попутно отметим, что в генной инженерии с целью преимущественной экспрессии гена «интересующего» белка используется гибридная плазмида именно с этим промотором.